DNase I(Deoxyribonuclease I)中文名称为
脱氧核糖核酸酶I,是一种可以消化单链或
双链DNA产生单
脱氧核苷酸或单链或双链的
寡脱氧核苷酸的
核酸内切酶。
DNase I水解单链或双链
DNA后的产物,5'端为
磷酸基团,3'端为羟基。DNase I活性依赖于
钙离子,并能被
镁离子或二价锰离子激活。镁离子存在条件下,DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点;二价锰离子存在条件下,DNase I可在同一位点剪切DNA双链,形成
平末端,或1-2个
核苷酸突出的粘末端。
用途:制备不含DNA的RNA样品;
RT-PCR反应前RNA样品中去除
基因组DNA等可能的DNA污染;体外T7, T3, SP6等
RNA聚合酶(RNA Polymerases)催化的
RNA转录后去除DNA模板;
DNaseI足迹实验(DNaseIfootprinting)研究DNA-
蛋白质相互作用;
缺口平移(nick translatioin);产生DNA随机片断文库;
细胞凋亡TUNEL检测中部分剪切基因组DNA作为
阳性对照。
失活或抑制:加入EDTA至终浓度为2.5mM后,65℃加热10分钟可使DNaseI失活。酚
氯仿抽提也可以使DNaseI失活。
金属离子螯合剂,达到毫摩尔/升浓度的锌离子,0.1%的
SDS,
DTT、
巯基乙醇等
还原剂,50-100mM以上盐浓度均对DNaseI有显著
抑制作用。
此外,在对
染色质进行低DNaseI处理,可发现酶切割将先发生在少数
特异性位点上,这些特异性位点叫做
DNaseI超敏感位点(DNaseI Hypersensitive Sites,DHSs ),它实际上是一段长约200bp的
DNA序列特异暴露的染色质区域,甲基化程度较低,富含HMG14,HMG17蛋白,一般在
转录起始附近或者相关部位。